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患者自体肿瘤细胞株的制作
目前在T细胞个体化治疗中肿瘤抗原的添加日渐受到重视,患者肿瘤抗原数量和质量直接关系到最终效应细胞的杀伤能力。比如DC+CIK的培养过程中,添加患者自体肿瘤组织抗原后的治疗效果要比不添加时好很多。随着肿瘤的早期诊断和早期治疗的快速发展,手术中切除下来的肿瘤组织体积越来越小,传统的直接把肿瘤组织裂解物添加到DC培养液中进行抗原递呈的方法越来越难,而且肿瘤组织裂解物中含有的血管内皮细胞、间质细胞、分泌物和坏死物等非肿瘤成分直接影响疗效。纯度高而抗原性强的病人肿瘤细胞株的制作是一个提供自体抗原的有效方法。我公司构建了带有端粒酶基因的逆转录病毒载体,制作出患者的半永生化癌细胞株用于后续特异性治疗,其简易流程如下:
 
目前有:
1. 克隆端粒酶基因。
2. 端粒酶基因亚克隆到TAKARA质粒载体pDON-AI中。
3. 使用TAKARA的逆转录病毒包装试剂盒制备含有端粒酶基因的逆转录病毒载体。
4. 手术前一天使用RetroNectin包被细胞培养瓶/板。
5. 患者手术肿瘤组织研磨过滤,得到单细胞悬液。
6. 洗涤RetroNectin包被的细胞培养瓶/板,移入单细胞悬液。
7. 贴壁培养一段时间后,再次用RetroNectin包被细胞培养瓶/板。
8. 使用制备好的逆转录病毒载体向细胞中转入端粒酶基因。
9. 使用G418进行抗性筛选。
10. 选择肿瘤标志物进行肿瘤细胞鉴定。
11. 扩大培养,建成患者自体肿瘤细胞系。
12. 肿瘤细胞可通过反复冻融、超声破碎或超速离心等方法处理后作为抗原提供DC。
 
 
 
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