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体细胞治疗中患者自体血浆的制备
为了减少患者自体细胞培养过程中未知微生物的交叉感染,国家药监局在《人体细胞治疗研究和制剂质量控制技术指导原则》中已明确指明禁用同种异体血浆。从这个意义上来说在我国进行的CIK等细胞治疗中是应避免使用AB血浆的?;颊咦蕴逖暮侠碛τ貌唤隹梢越档拖赴呐嘌杀?,也可以取得更佳的培养效果。
 
操作例:
1. 注采50 ml 外周血,置于2支50 ml的离心管 (A、B管) 中,分别加入6%HES (羟乙基淀粉) 5 ml。
2. 混匀后室温静置30分钟,红细胞和HES结合沉降于离心管底部。
3. 将A、B管上部含有白细胞的血浆移至新的离心管 (C管) 。
4. 将A和B管离心 (400 g,10 min) 后,取红细胞上部的少量血浆也加入C管。
5. 离心C管 (400 g,10 min),上清液移至新离心管 (D管);C管下部的细胞作Ficoll分离PBMC用。
6. 将D管放入56 ℃水浴30分钟,灭活补体。
7. 离心 (800 g,20 min) 除去D管中絮状沉淀物,将上清移至新离心管 (E管) 。
8. E管中的上清 (约25 ml) 作为患者的自体血浆可在细胞培养中添加使用。
9. 使用G418进行抗性筛选。
 
注意:
6%HES (羟乙基淀粉) 是临床药品级别 (如北京费森尤斯卡比医药有限公司的产品:贺斯),在最终的自体血浆中稍有混入,不存在安全问题,也不影响细胞的生长。
日本原产的GT-T551 H3培养基中只要加入上述的0.6%自体血浆,就可在淋巴细胞或DC细胞培养中获得更好的培养效果。
 
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